Medicus 2014;23(2):117-126
PQI izaziva oksidaciju i arilaciju u tijelu. U jetri na mitohon-
drijima izaziva oksidaciju tiolnih skupina, nastaje disfunk-
cija mitohondrija i razvoj kisikovih reaktivnih tvari – kod
paracetamolske toksičnosti primjećuje se porast oftalmičke
kiseline, biomarkera oksidativnog stresa (38). S pomoću
LC/MS-a, na sličnom animalnome modelu, Sun i suradnici
određivali su u urinu metabolit N-acetil-cistein-acetamino-
fen (39).
Svrha iduće studije bila je određivanje N-acetil-cistein (NA-
C)-konjugata paracetamola u ljudskomurinu. Nakon razdvaja-
nja LC-a autori su rabilimijenjanje polariteta u tri-kvadrupolM
(LC/MS). Metoda se koristi snimkom nastalom gubitkom ne-
utralnosti ili monitoringommultiplih reakcija (MRM-EPI me-
toda) iz predviđenog odnosa vrijednosti mase i naboja (M/Z).
Brzo se dobiva selektivna detekcija NAC-konjugata. Korisnost
metode provjerili su analizomNAC-konjugata nakon jedne pe-
roralne doze. Ovom metodom dobiju se tri konjugata parace-
tamola (dva od tih konjugata inače su prisutna sporadično kao
rezultat metabolizma hidroksil-paracetamola i metoksi-para-
cetamola). Također su testirali detekciju reaktivnihmetabolita
diklofenaka, a NAC im je bio hvatajuća tvar. U tom dijelu za-
ključuju da je njihova metoda jednako dobra kao ona koja rabi
glutation (GSH) kao hvatajuću tvar (40).
Loo i suradnici izradili su simulacijski model za predviđanje
(
screening
) prisutnosti paracetamola i ibuprofena. Koristi-
li su se metodom
orthogonal projection to latent structures
discriminant analysis
(OPLS-DA)
algorithm
. Za optimalni
paracetamolski predikcijski model najprije su trebali učiniti
preprocesiranje parametara (normalizacija, širina vrpce u
spektru, skaliranje, ulazni parametri). Rezultat modeliranja
bio je vrlo dobar – optimalizirani i validirani paracetamolski
model ispravno je predvidio 98,2%, a ibuprofenski model
korektno je predvidio 99% uzoraka urina koji su doista sadr-
žavali metabolite ovih lijekova (41).
Winnike i suradnici tražili su individualne pacijente koji
su podložni medikamentnom oštećenju jetre. U studiji su
ispitanici tijekom sedam dana uzimali 4 grama paraceta-
mola i svakodnevno im je skupljan urin, metabolomički
obrađen, a uz to je svakodnevno određivana vrijednost
alanin-aminotransferaze (ALT) u krvi. Uspjeli su dokazati
da su kod nekih ispitanika relativno brzo nakon započete
terapije, a svakako prije povišenja ALT-a u krvi, u meta-
bolomičkoj obradi urina dokazani metaboliti koji nastaju
od toksičnog metabolita NAPQI, a koji mogu poslužiti kao
prediktori medikamentnog oštećenja jetre, no za njegovu
statistički značajnu predikciju potrebno je uključiti i endo-
gene metabolite. Smatraju da bi njihov pristup „rane far-
makometabolomičke intervencije“ mogao biti testiran u
kliničkim studijama s drugim, potencijalno hepatotoksič-
nim lijekovima (42).
N-acetil-benzokinon-imin u normalnim se dozama brzo
detoksificira reduciranim glutationom i izlučuje urinom na-
kon konjugacije s cisteinom i merkapturnom kiselinom.
Skupina autora razvila je jednostavnu i pouzdanu metodu
za kvantificiranje paracetamola i NAPQI iz uzorka plazme
od svega 0,1 ml, što je za pedijatrijsku populaciju izrazito po-
voljno. Rabili su HPLC obrnute faze i UV detektor (43, 44).
Obavljeno je opsežno pretkliničko animalno testiranje akut-
ne i kronične toksičnosti paracetamola. Metaboličke pro-
mjene nađene NMR-om i UPLC/MS-om urina kombinirane
su s histopatološkim nalazima u jetri, kao i serumskim AST-
om, ALT-om i bilirubinom. Cilj ispitivanja bila je detekcija
metabolita najbolje povezanog s paracetamolskom hepa-
totoksičnošću. Obje metode pokazale su smanjenje antiok-
sidansa i energetskih metabolita. Posebno je bio zanimljiv
nalaz NMR-a, koji je pokazao pad u razini 1-metilnikotinata
u urinu. Ova molekula povezana je s putom biosinteze glu-
tationa i stvara se za vrijeme konverzije S-adenozilmetioni-
na u S-adenozilhomocistein. Ciljani je LC/MS/MS pokazao
smanjenje S-adenozilmetionina (45).
Ovi su rezultati potvrđeni u sljedećoj studiji koja je ispitivala
regulaciju transsulfuracijskog puta u uvjetima toksičnosti
za jetru (NMR, LC/MS), ali i podatke genske ekspresije: na-
đeno je da u štakora nakon davanja paracetamola nalazimo
smanjenu ekspresiju gena uključenih u transsulfuracijski
put u jetri, dok su u urinu povišeni S-adenozilmetionin (LC/
MS) te taurin i kreatin (NMR) (46).
Nastavak istraživanja na ovomemodelu pokazao je da konju-
girani metabolit paracetamola N-acetilcistein-paracetamol
u urinu dobro korelira sa serumskim AST-om, bilirubinom,
kreatinom i histopatologijom, a u značajnoj je antikorelaciji
s razinama S-adenozilmetionina, što je prema njihovu mi-
šljenju dobar indikator paracetamolske hepatotoksičnosti.
Upotrijebljeni su UPLC/MS i NMR u procjeni ekskrecijske
kinetike (prisutnosti u urinu) glavnih metabolita lijeka.
Davali su 400 mg/kg odnosno 1600 mg/kg paracetamola.
N-acetil-L-cistein-acetaminofen (APAP-NAC) pokazao se
kao metabolit sa statistički signifikantnom korelacijom s
rutinskim kliničkim biokemijskim nalazima, ali i histopa-
tološkim podatcima u štakora. Zaključuju da se potencijal
toksičnosti lijeka može procijeniti studijom metaboličkog
profila lijeka (47).
TRAMADOL
Glavnina metaboliziranja tramadola zbiva se u mikrosomi-
ma jetre. Tramadol je supstrat za 2D6 i 3A4 (54). Osnovni
metabolički put jesu O i N-demetilacija (CYP3A4). Nastali
metaboliti su O-desmetiltramadol i N-desmetiltramadol
(koji se naziva i nortramadol) (48). Autori su pokazali s po-
moću GC/MS-a urina životinja nakon derivatizacije da od
spojeva kemijske strukture poput tramadola nastaje još ne-
koliko metabolita.
Lijekovi kao tramadol, koji imaju dualni FD učinak, razli-
čito će iskazivati učinke kod pacijenata koji imaju različitu
genski uvjetovanu aktivnost ključnoga metabolizirajućeg
enzima 2D6. Svojstva tramadola ići će u smjeru monoami-
123
Od genomike dometabolomike analgetika u djece
